Invitrogen核/膜系统 一、 实验原理： 酵母双杂交系统是在酵母体内通过重建有活性转录因子的结构来鉴定蛋白质之间的相互作用。转录因子可以和DNA上特异的序列结合而启动相应基因的转录.另外实验详情和步骤都做了阐述。这种DNA结合与转录激活的功能是由转录因子上两个相互独立的结构域即DNA结合结构域(Binding Domain, BD)和转录激活结构域(Activation Domain, AD)分别来完成的，并且这两个结构域对于基因的转录激活都是必须的。 酵母双杂交系统由Fields和Song等首先在研究真核基因转录调控中建立 。典型的真核生物转录因子，西安淳风生物科技有限公司,西安淳风生物科技有限公司, 如GAL4、GCN4、等都含有二个不同的结构域: DNA结合结构域(DNA-binding domain)和转录激活结构域(transcription-activating domain)。前者可识别DNA上的特异序列， 并使转录激活结构域定位于所调节的基因的上游，了解南宁酵母双杂交文库实验,西北医药、保养，租南宁酵母双杂交文库实验,贵阳医药、保养， 转录激活结构域可同转录复合体的其他成分作用，高品质南宁酵母双杂交文库实验,贵阳医药、保养， 启动它所调节的基因的转录。 二、实验步骤： 1.1 RNA提取 1.2 mRNA分离 1.3 cDNA初级文库的构建 1.3.1 cDNA一链的合成 1.3.2 cDNA第二链的合成 1.3.3 cDNA adapter的制备 1.3.4 cDNA与attB1重组接头连接(三份接头各连一份) 1.3.5 cDNA分级分离 1.3.6 BP重组 1.3.7 电转化大肠杆菌DH10B 1.3.8 文库克隆检测 1.3.9 文库库容量、重组率、插入片段长度鉴定 1.4 cDNA次级文库的构建 1.4.1 初级文库的质粒抽提 1.4.2 LR重组 1.4.3 电转化大肠杆菌DH10B 1.4.4 文库克隆检测 1.4.5 文库库容量、重组率、插入片段长度鉴定

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