3. 低丰度及稀有序列的精确定量:目前对于低丰度目标序列的检测,定量PCR、杂交等方法都因受到背景DNA的干扰,使得检测灵敏度及精确性都达不到精细定量的要求(如定量PCR检测中Ct值大于33的情况下,其重复性就不是很高),而微滴式数字PCR系统通过核心的微滴化处理,使得稀有的核酸序列从大量的背景DNA中分离出来,从而提高了检测的灵敏度及精确性遗传标记从最早期的RFLP(RestrictionFragment Length Polymorphis,限制性内切酶片段长度多态性)、STR(ShortTandemRepeat,短串联重复序列),直到SNP(SingleNucleotide Polymorphism,单核苷酸多态性)和CNV(CopyNumberVariations,拷贝数变异)都致力于解开"变异"水平上的谜团,因为这些变异和发育、疾病、进化等等都息息相关
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什么是PCR技术?
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PCR是如何快速扩增的?
每一循环经过变性、退火和延伸,DNA含量即增加一倍。如图所示:现在有些PCR因为扩增区很短,即使Taq酶活性不是最佳也能在很短的时间内复制完成,因此可以改为两步法,即退火和延伸同时在60℃-65℃间进行,以减少一次升降温过程,提高了反应速度。
请问PCR有什么特点?
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PCR常用的浓度是多少?
PCR常用的浓度为50~200μmol/L,不能低于10~15μmol/L
PCR失败的原因及如何改善?
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